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荧光数据表 · 测量示例

荧光寿命/量子产率标准、探针与染料参数表，以及 ISS 仪器实测曲线与成像示例。内容同步自 ISS 官方资源页。

6 类荧光数据表

寿命标准 · 探针 · 量子产率 · 染料参数

185 条测量示例

衰减曲线 · FLIM · 光谱 · 各向异性

LED和激光二极管的荧光标准

以下数据表格提供了推荐与LED和激光二极管共同使用的寿命标准名字和寿命

LED

中心波长 (nm) 标准 溶剂 寿命 (ns)
280 对三联苯 乙醇 1.05
280 PPO 乙醇 1.46
295 对三联苯 乙醇 1.05
295 PPO 乙醇 1.46
300 对三联苯 乙醇 1.05
300 PPO 乙醇 1.46
330 1,4-二 [2- (4-甲基-5-苯基恶唑)]苯 乙醇 1.45
330 BBO 乙醇 1.24
370 1,4-二 [2- (4-甲基-5-苯基恶唑)]苯 乙醇 1.45
370 BBO 乙醇 1.24
460 荧光素 PBS 4
460 BodipyFL染料 水 5.8
480 荧光素 PBS 4
480 BodipyFL染料 水 5.8
520 罗丹明 B 水 1.7
520 罗丹明 590 水 4.1

PBS = 磷酸盐缓冲液生理盐水 POPOP = 1,4-双(5-苯基恶唑)苯 PPO = 2,5-二苯基唑 BBO = 2,5-双([1,1'-联苯]-4-基)-恶唑

荧光寿命标准
纳秒寿命标准 寿命 (ns) 寿命测量条件 激发 (nm) 发射 (nm) 参考号
NADH 0.4 0.1 M PB 7.4, 20 °C 330 - 370 400 - 600 1
NATA 3.0 0.1 M PB 7.0, 20 °C 275 310 - 400 1
对三联苯 1.05 乙醇 280 - 340 310 - 412 2
PPD 1.20 乙醇 240 - 340 310 - 440 2
PPO 1.4 乙醇 280 - 350 330 - 480 2
POPOP 1.35 乙醇 280 - 390 370 - 540 2
1,4-二 [2- (4-甲基-5-苯基恶唑)]苯 1.45 乙醇 300 - 400 390 - 560 2
2-氨基嘌呤 11.34 水 290 380 2
左旋酪氨酸 3.27 水 285 300 2
邻氨基苯甲酸 8.67 水 290 400 2
吲哚 4.49 水 290 360 2
荧光素、二阴离子 4.1 ± 0.1 NaOH/水 400 490 - 520 3
罗丹明B 1.74 ± 0.02 水, 20 °C 400 583 4
荧光探针
荧光探针 平均寿命 (ns) 吸收最大值 (nm) 发射最大值 (nm)
游离态 结合态 游离态 结合态 游离态 结合态
1.09 1.68 362 335 500 503
1.4 1.66 349 331 482 398
0.92 3.66 506 506 534 534
1.20 2.31 555 555 576 576
2.55 4.11 588 588 610 612
1.35 11.6 356 336 500 503
0.84 8.16 353 337 487 493
1.21 3.63 506 506 532 532
0.52 0.59 350 344 546 504
1.13 2.39 507 507 532 532
1.19 3.74 539 510 616 542
1.11 3.67 540 508 623 543
0.94 4.60 547 514 623 545
1.51 0.52 576 549 638 585
1.55 0.33 579 552 633 583
1.03 4.51 557 524 635 559
2.59 1.79 575 570 630 600
2.92 0.45 571 484 587 578
4.49 3.17 503 484 528 514
参考文献
  1. J.R. Lakowicz (Editor) Topics in Fluorescence Spectroscopy (Vol. 4): Probe Design and Chemical Sensing Plenum Press, New York and London, 1994.
荧光蛋白质
荧光蛋白质 消光系数 Q.Y. 激发 max (nm) 发射 max (nm) pH依赖性半最大效应浓度 相对漂白时间
EBEFP 31,000 0.25 383 445 5.8 3
ECEFP 26,000 0.40 434 477 4.7 85
EGEFP 55,000 0.60 489 508 5.9 100
EYEP 84,000 0.61 514 527 6.5 35
dsRed 72,500 0.68 558 583 4.3 145
参考文献
  1. Patterson et al. J. Cell Science 114 (5), 837, 2001.
  2. Baird et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 11984, 2000.
  3. Matz et al. Nat. Biotechnol. 17, 969, 1999.
荧光量子产率标准
量子产率 (QY) 标准 QY (%) QY测量的条件 激发 (nm) 参考号
Cy3 4 PBS 540 1
Cy5 27 PBS 620 1
甲酚紫 54 甲醇, 22 °C 540 - 640 2
荧光素 95 ± 3 0.1 M NaOH, 22 °C 496 2
POPOP 97 环己烷 300 2
硫酸奎宁 57.7 0.1 M H 2 SO 4 , 22 °C 350 2
罗丹明 101 100 乙醇 450 - 465 2
罗丹明 6G 94 乙醇 488 2
罗丹明 B 31 水 514 3
色氨酸 13 ± 1 水 280 2
酪氨酸 14 ± 1 水 275 2

PBS = 磷酸盐缓冲生理盐水 POPOP = 1,4-双 (5-苯基-2-恶唑基)苯

参考文献
  1. R.B. Mujumdar, L.A. Ernst, S.R. Mujumdar, C.J. Lewis, A.S. Waggoner Cyanine dye labeling reagents: sulfoindocyanine succinimidyl esters. Bioconj Chem 4, 105-111, 1993.
  2. J.R. Lakowicz Principles of Fluorescence Spectroscopy, 3rd Ed. Springer Science+Business Media, LLC, 2006, p. 54.
  3. D. Magde, G.E. Rojas, and P. Seybold Solvent Dependence of the Fluorescence Lifetimes of Xanthene Dyes. Photochem. Photobiol. 70, 737, 1999.
被选荧光团的寿命数据
荧光团 寿命 (ns) 溶剂 激发 max (nm) 发射 max (nm)
5-羟色胺     370 - 415 520 - 540
ATTO 565 3.4 Water 561 585
ATTO 655 3.6 Water 655 690
Acridine Orange 2.0 PB pH 7.8 500 530
Acridine Yellow     470 550
Alexa Fluor 488 4.1 PB pH 7.4 494 519
Alexa Fluor 532     530 555
Alexa Fluor 546 4.0 PB pH 7.4 554 570
Alexa Fluor 633 3.2 Water 621 639
Alexa Fluor 647 1.0 Water 651 672
Alexa Fluor 680 1.2 PB pH 7.5 682 707
BODIPY 500/510     508 515
BODIPY 530/550     534 554
BODIPY FL 5.7 Methanol 502 510
BODIPY TR-X 5.4 Methanol 588 616
Cascade Blue     375 410
Coumarin 6 2.5 Ethanol 460 505
CY2     489 506
CY3B 2.8 PBS 558 572
CY3 0.3 PBS 548 562
CY3.5 0.5 PBS 581 596
CY5 1.0 PBS 646 664
CY5.5 1.0 PBS 675 694
Dansyl     340 520
DAPI 0.16 TRIS/EDTA 341 496
DAPI + ssDNA 1.88 TRIS/EDTA 358 456
DAPI + dsDNA 2.20 TRIS/EDTA 356 455
DPH     354 430
Erythrosin     529 554
Ethidium Bromide - no DNA 1.6 TRIS/EDTA 510 595
Ethidium Bromide + ssDNA 25.1 TRIS/EDTA 520 610
溴化乙锭 + dsDNA 28.3 TRIS/EDTA 520 608
FITC 4.1 PB pH 7.8 494 518
荧光素 4.0 PB pH 7.5 495 517
FURA-2     340 - 380 500 - 530
GFP 3.2 缓冲液 pH 8 498 516
Hoechst 33258 - 没有DNA 0.2 TRIS/EDTA 337 508
Hoechst 33258 + ssDNA 1.22 TRIS/EDTA 349 466
Hoechst 33258 + dsDNA 1.94 TRIS/EDTA 349 458
Hoechst 33342 - no DNA 0.35 TRIS/EDTA 336 471
Hoechst 33342 + ssDNA 1.05 TRIS/EDTA 350 436
Hoechst 33342 + dsDNA 2.21 TRIS/EDTA 350 456
HPTS 5.4 PB pH 7.8 454 511
Indocyanine Green 0.52 Water 780 820
Laurdan     364 497
Lucifer Yellow 5.7 Water 428 535
Nile Red     485 525
Oregon Green 488 4.1 Buffer pH 9 493 520
Oregon Green 500 2.18 Buffer pH 2 503 522
Oregon Green 514     511 530
Prodan 1.41 Water 361 498
Pyrene > 100 Water 341 376
Rhodamine 101 4.32 水 496 520
罗丹明110 4.0 水 505 534
罗丹明123     505 534
罗丹明6G 4.08 Water 525 555
罗丹明B 1.68 水 562 583
Ru(bpy) 3 [PF 6 ] 2 600 水 455 605
Ru(bpy) 2 (dcpby)[PF 6 ] 2 375 Buffer pH 7 458 650
SeTau-380-NHS 32.5 水 270 480
SeTau-404-NHS 9.3 水 402 515
SeTau-405-NHS 9.3 Water 405 518
SeTau-425-NHS 26.2 水 340 425 545
SITS     336 438
SNARF     480 600-650
二苯基乙烯SITS, SITA     365 460
Texas Red 4.2 水 589 615
TOTO-1 2.2 水 514 533
YOYO-1 no DNA 2.1 TRIS/EDTA 457 549
YOYO-1 + ssDNA 1.67 TRIS/EDTA 490 510
YOYO-1 + dsDNA 2.3 TRIS/EDTA 490 507
YOYO-3     612 631

PBS = 磷酸盐缓冲溶液pH 7.4 PB = 磷酸缓冲液 TRIS/EDTA (1mM, pH 7.4) = 三羟甲基氨基甲烷/乙二胺四乙酸. ss = 单链 ds = 双链